Conceito de RACE-PCR
RACE-PCR
significa “Rapid Amplification of Complementary DNA Ends), ou seja,
permite a amplificação de sequências de DNA complementar (cDNA) entre
uma região interior conhecida e a extremidade 5’ ou 3’.
Tradicionalmente, a reação de PCR envolve a utilização de dois primers
específicos, que correspondem às extremidades da sequência que se
pretende amplificar. No entanto, nem todas as sequências que se
pretendem estudar são completamente conhecidas. Mas o RNA mensageiro
(mRNA) possui uma região bastante conservada e conhecida: a cauda
poly(A). Surge portanto desta característica o RACE-PCR. Este é
utilizado para a amplificação de mRNAs raros. Os produtos resultantes do
3’ RACE e do 5’ RACE podem ser combinados para produzir cDNAs completos.
3’ RACE
Esta técnica envolve a síntese de cDNA a
partir de uma amostra de mRNA, utilizando a transcriptase reversa e o
primer
complementar da cauda
poly(A). Durante esta fase é também adicionada uma sequência adaptadora
à extremidade 5’ de cada cDNA. A cadeia de RNA é depois destruída por
uma RNase, específica para cadeias RNA-DNA. O cDNA é amplificado
recorrendo-se a um primer específico do gene de interesse que é
complementar de uma região conhecida do cDNA e um primer que irá
emparelhar com a sequência adaptadora. São amplificados diversos
produtos, dependendo da especificidade do primer específico do gene.
5’ RACE
Este
tipo de RACE utiliza um primer que emparelha com uma região conhecida do
mRNA e depois a transcriptase reversa sintetiza um cDNA complementar à
porção 5’ dessa cadeia de RNA. Para a reação de PCR é necessário criar
um local de emparelhamento para um primer, que corresponde à síntese de
uma cauda homopolimérica na extremidade 3’ do cDNA pela enzima terminal
deoxynucleotidyl transferase. Depois é amplificado o cDNA, utilizando-se
um primer específico para o gene alvo (liga-se à região conhecida do
cDNA) e um primer universal (emparelha com a cauda homopolimérica).
|
Procure outros termos na nossa enciclopédia
|
A |
B |
C |
D |
E |
F |
G |
H |
I |
J |
K
| L |
M |
N |
O |
P |
Q |
R |
S |
T |
U |
V |
W |
X |
Y |
Z |
|
|
