Reação de DNA Polimerase em Cadeia
(Polymerase Chain Reaction, PCR)
Descrita pela primeira
vez em 1983 por Kary Mullis, a Reacção de Polimerase em Cadeia,
comumente designada por PCR, permite a amplificação de sequências
de DNA. Convencionalmente, uma reação de PCR envolve os seguintes
elementos: DNA template ou DNA molde, tampão da enzima, co-fator
da enzima, dNTPs, mistura de primers, água ultrapura e DNA polimerase (a
última a ser adicionada à mistura de reação). A concentração dos vários
intervenientes da reacção é ajustada às condições óptimas de atividade
da DNA polimerase
utilizada.
O processo consiste basicamente em utilizar os mecanismos de replicação
in vitro e envolve três etapas:
1.
Desnaturação, 94 ºC:
Ocorre
a quebra das pontes de hidrogénio e a separação das cadeias de DNA;
2.
Anneeling,
50-60 ºC:
Emparelhamento
dos primers com o DNA molde;
3.
Extensão, 72 ºC: A DNA
polimerase
sintetiza uma nova cadeia de DNA.
Geralmente
são
realizados
30-35 ciclos para cada reação.
Esta
técnica permite a
realização de estudos de natureza variada, tais como o desenvolvimento
de métodos de diagnóstico altamente específicos e sensíveis, a obtenção
de grandes quantidades de DNA para sequenciamento, a análise sobre a
diversidade genética de populações, entre outras.
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