Conceito de
Mutagénese Dirigida
As
propriedades das proteínas podem ser alteradas por mutagénese
dirigida ou evolução direcionada / evolução experimental in vitro.
Esta última técnica não necessita do conhecimento da estrutura da
proteína. Baseia-se nos princípios da evolução natural, isto é, na
produção de variabilidade e seleção. No entanto, neste caso a seleção é
realizada pelo cientista. A diversidade molecular pode ser gerada por
mutagénese aleatória de um gene que codifique para determinada proteína
ou por quimeragenese de dois ou mais genes. Estas bibliotecas de genes
mutantes são então expressas em microrganismos, como por exemplo em
Escherichia coli. Os clones que demonstram melhoramento numa
propriedade desejada são isolados em high-throughput screens
ou seleções. Os clones selecionados podem ainda ser outra vez mutados
e/ou recombinados aleatoriamente para serem novamente expressos e
selecionados.
A
mutagénese dirigida permite realizar a indução de mutações
específicas. O estudo das características de uma proteína pode ser
realizada por mutagénese dirigida. Um nucleótido específico num
gene pode ser substituído por outro nucleótido. Isto pode levar à
alteração de um aminoácido da proteína codificada por esse gene.
A
mutagénese dirigida é também utilizada para aumentar a expressão
proteica em sistemas heterólogos. A utilização de tecnologia de DNA
recombinante na produção de proteínas nestes sistemas de expressão
está na base da utilização da mutagénese dirigida. Podem-se alterar por
mutagénese determinados codões que são pouco utilizados por
outros codões equivalentes no DNA. Isto pode, consequentemente, provocar
o aumento o rendimento da expressão proteica.
A
mutagénese dirigida envolve a utilização de oligonucleótidos
mutagénicos sintéticos que emparelham na zona do gene
que
se pretende alterar. Esses oligonucleótidos possuem uma ou mais bases
internas que não emparelham e que especificam a mutação a introduzir. A
confirmação de que a mutação foi introduzida pode ser feita por
hibridação com o próprio oligonucleótido mutagénico ou por sequenciação
de direta de DNA.
|
Procure outros termos na nossa enciclopédia
|
A |
B |
C |
D |
E |
F |
G |
H |
I |
J |
K
| L |
M |
N |
O |
P |
Q |
R |
S |
T |
U |
V |
W |
X |
Y |
Z |
|
|
