Estou aqui: Início » Ciências da Terra e da Vida » Biologia

Método de Lowry

Autor: Mara Marques
Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

Data de criação: 09/03/2015;

Resumo: Apresentação do conceito de Método de Lowry...
Pelo método de Lowry procede-se à determinação da concentração total de proteína. O princípio do método baseia-se na utilização de (...)

Palavras chave:  biologia

Conceito de Método de Lowry

Pelo método de Lowry procede-se à determinação da concentração total de proteína. O princípio do método baseia-se na utilização de uma mistura contendo molibdato, tungstato e ácido fosfórico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma redução quando reage com proteínas, na presença do catalisador cobre (II). Isto produz um composto com absorção máxima a 750 nm. Esta redução ocorre diretamente através das cadeias laterais de alguns aminoácidos (tirosina, triptofano, cisteína, asparagina e histidina), que contribuem com quatro eletrões, ou através da remoção de dois eletrões de cada unidade tetrapeptídica das proteínas, que é facilitada pela formação do quelato entre o cobre (II) e as proteínas. Deste modo, o método de Lowry envolve duas reações químicas. A primeira reação é a redução do ião cobre (II) em condições alcalinas (básicas), formando um complexo com as ligações peptídicas, denominada reação de Biureto. A segunda reação envolve a redução do reagente Folin-Ciocalteu pelo complexo cobre-ligação peptídica, causando uma mudança na coloração da solução para azul. Por espetrofotometria podem ler-se as amostras tratadas com este método entre 650 a 750 nm. A quantidade de proteína pode ser estimada utilizando uma curva padrão com outra proteína, isto é, cuja concentração seja conhecida como a albumina bovina sérica.

A principal vantagem do método de Lowry é a sua alta sensibilidade. O método de Lowry é mais sensível que a determinação UV e também mais sensível que o método de Biureto. Algumas desvantagens são o tempo da reação, e a incompatibilidade com detergentes e agentes redutores.