Conceito de Método do ácido
bicinconínico
O método do ácido bicinconínico (BCA), tal como o
método de Lowry, baseia-se na conversão de cobre (II) para cobre (I) em
condições básicas. Isto é denominado reação de Biureto. O reagente
ácido bicinconínico é composto por carbonato de sódio, bicarbonato
de sódio, ácido bicinconínico, tártaro de
sódio
e hidróxido de sódio. Apresentam influência na reação de Biureto alguns
resíduos de aminoácidos e a ligação peptídica.
O ácido bicinconínico é um reagente cromogénico –
substância que dá cor à reação - específico para cobre (I). Duas
moléculas de ácido bicinconínico reagem com um ião cobre (I),
formando um complexo de cor púrpura. A quantidade de cobre (II) reduzido
– isto é, cobre (I) - é proporcional à concentração de proteína. Uma vez
que duas moléculas de ácido bicinconínico reagem com um ião cobre
(I),
a quantidade de reagente cromogénico é também proporcional à
concentração de proteína. A mudança de cor para púrpura, que absorve a
cerca de 562 nm, pode ser analisada espetrofotometricamente. A
absorvância medida a 562 nm é diretamente proporcional à concentração de
proteína presente na amostra. A quantidade de proteína pode ser estimada
utilizando uma curva padrão com outra proteína, isto é, uma proteína
cuja concentração seja conhecida, como a albumina bovina sérica.
O ensaio do ácido bicinconínico é mais tolerante a
detergentes e agentes desnaturantes como ureia e cloreto de guanidina.
Isto é uma vantagem sobre outros métodos colorimétricos, como o método
de Lowry, em
que
interferem estes químicos. Contudo, existem agentes redutores que podem
interferir no ensaio do ácido bicinconínico.
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