Conceito de Gel de Agarose
Uma das técnicas mais utilizadas para a
determinação do tamanho dos fragmentos de ácidos nucleicos é a técnica
de electroforese em gel de agarose. É uma técnica básica de separação
de moléculas, utilizada em inúmeras pesquisas laboratoriais e ainda em
uso em alguns laboratórios forenses. Permite o tratamento e análise de
DNA e observar resultados de amplificações, contaminações e digestões do
material biológico utilizado. Baseia-se no princípio de migração de
fragmentos de ADN tendo em conta o seu tamanho, através da aplicação de
uma corrente eléctrica. A agarose, funciona como uma rede/peneira
através da qual migram as moléculas de ADN. Quanto mais pequenos forem
os fragmentos mais facilidade têm ao atravessar a rede, migrando mais
rapidamente que os fragmentos de maior peso molecular. Como o ADN têm
polaridade negativa, ao aplicar uma corrente eléctrica, os fragmentos de
ADN vão migrar do pólo negativo para o pólo positivo. O deslocamento
conjunto de moléculas com o mesmo tamanho resulta na formação de bandas.
Ao mesmo tempo, aplica-se amostras padronizadas cujo o perfil de bandas
é conhecido e identificado (os marcadores moleculares). O número de
pares de bases de todas as bandas dos marcadores moleculares é conhecido
por isso, é possível determinar o tamanho das bandas em estudo por
comparação, funcionando assim como uma régua.
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