Conceito de Ensaio de Bradford
O ensaio de Bradford é um ensaio colorimétrico
para determinação total de proteína. Este método baseia-se na mudança de
absorvância do corante Azul Brilhante de Coomassie G-250 que se liga às
proteínas, em concreto aos resíduos de aminoácidos e às suas bases
aromáticas. Em condições ácidas, o corante Azul Brilhante de Coomassie
G-250 fica maioritariamente na sua forma catiónica protonada, que
apresenta coloração vermelha com um máximo de absorção a 470 nm. A
ligação do corante Azul Brilhante de Coomassie G-250 às proteínas induz
a conversão do corante a uma forma estável não protonada, de coloração
azul, e com um máximo de absorção a 595 nm. Esta forma, azul e não
protonoada
é detetada pela leitura de absorvância a 595 nm por
espetrofotometria a fim de quantificar a concentração de proteínas.
Durante a formação deste complexo, dois tipos de interação acontecem. As
interações iónicas e hidrofóbicas estabilizam a forma aniónica do
corante, causando uma mudança visível da cor. É um método sensível,
pois o complexo proteína-corante apresenta um coeficiente de extinção
molar elevado.
Algumas
desvantagens
do método de Bradford são a sua incompatibilidade com detergente
e ser menos preciso para proteínas de caracter acídico ou básico. Uma
vantagem deste método é sua compatibilidade com agentes redutores, o que
não acontece com outros métodos como o método de Lowry e BCA.
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