Conceito de Coloração de Gram
A
coloração de Gram é um
procedimento
que permite distinguir bactérias Gram-negativa – adquirem
a coloração avermelhada – de bactérias Gram- positivas – adquirem
uma cor entre o azul e o violeta. É deste modo uma técnica de
caracterização fenotípica de bactérias. Isto acontece pelas diferenças
na estrutura da parede celular das eubactérias, como a espessura
da camada de peptidoglicano. As bactérias Gram-positivas
têm uma camada de peptidoglicano mais espessa do que as
bactérias
Gram-negativas.
O
procedimento não é aplicável a células eucarióticas ou células do grupo
Archaea porque estas não
possuem
a camada de peptidoglicano.
Este método
de coloração das células bacterianas foi desenvolvido por Hans
Christian Gram (século XIX). O método requer quatro passos básicos.
Primeiro, a aplicação de uma coloração primária – violeta de cristal –
num esfregaço, seguido da adição de um mordente – Iodo de Gram –
para aumentar a afinidade do violeta de cristal para as células. Depois
as células são rapidamente descoloradas com acetona, álcool, ou uma
mistura de ambos. Por último, é utilizado um contrastante como a
safranina que dá a cor vermelha ao citoplasma. Os esfregaços são então
visualizados ao microscópio. Nas bactérias Gram-negativas, o
precipitado formado no passo de adição do mordente é removido no passo
da aplicação do agente descolorante. Isto acontece devido à menor
espessura da camada de peptidoglicano e ao facto de a membrana
externa ser praticamente solubilizada pelo agente descolorante.
Consequentemente, o citoplasma cora de vermelho para as bactérias
Gram-negativas, devido à safranina que foi aplicada posteriormente.
Os
bacilos esporulados e a maioria dos cocos são Gram-positivos. As
espiroquetas e a maioria dos
bacilos
não esporulados são Gram-negativos.
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